【摘要】目的 研究高磷对大鼠血管平滑肌细胞(RVSMC)钙化的影响和OPG mRNA表达的影响,及骨保护素(OPG)对高磷诱导RVSMC钙化的作用及其相关机制。方法 用不同的试剂培养RVSMC,分别为正常磷组(Pi 1.4mmol/L)、高磷组(Pi2.0mmol/L、Pi2.6mmol/L)、凋亡抑制组(Pi2.6mmol/L+ZVAD.FMK0.1μmol/L,Pi 2.6mmol/L+ZVAD.FMK1.0μmol/L,Pi2.6mmol/L+ZVAD.FMK2.0μmol/L)、骨保护素组(Pi2.6mmol/L+OPG1μg/ml,Pi2.6mmol/L+OPG10μg/ml,Pi2.6mmol/L+OPG100μg/ml)。全自动生化仪比色法测定钙含量,BCA法测定蛋白含量,用蛋,白含量标化钙含量。同时行Von Kossa染色观察细胞钙化情况。用半定量PCR(RT-PCR)法检测RVSMC OPG mRNA的表达。流式细胞仪测定各组的细胞凋亡量。结果 ①培养3天,6天,9天时,高磷组(Pi2.0mmol/L,Pi2.6mmol/L)与Pi1.4mmol/L相比,RVSMC钙沉积较多(P<0.05);②培养第6天时,Pi2.6mmol/L +ZVAD.FMK0.1μmol/L组的钙沉积与Pi2.6mmol/L组相比无统计学差异,而Pi2.6mmol/L+ ZVAD.FMK 1.0μmol/L,Pi2.6mmol/L+ ZVAD.FMK 2.0μmol/L组与Pi2.6mmol/L组相比,RVSMC钙沉积较少(P<0.05)。Pi2.6mmol/L+OPG10μg/ml、Pi2.6mmol/L+ OPG100μg/ml组与Pi2.6mmol/L组相比,细胞钙沉积较少(P<0.05)。Pi2.6mmol/L+ OPG100μg/ml与Pi2.6mmol/L相比,细胞钙沉积明显降低(P<0.01);③Von Kossa染色显示:Pi1.4mmol/L组钙化不明显;Pi2.6mmol/L组细胞有大量黑色颗粒沉积;而Pi2.6mmol/L+OPG100μg/ml组较少。培养第6天时,Pi2.6mmol/L组与Pi2.0mmol/L组;Pi2.0mmol/L,Pi1.4mmol/L相比,OPG mRNA表达较多(P<0.05)。培养第6天时,Pi2.6mmol/L与Pi1.4mmol/L相比,细胞凋亡量较多(P<0.05);Pi 2.6mmol/L+OPG100μg/ml与Pi2.6mmol/L相比细胞凋亡量较少(P<0.05)。结论 高磷可能通过诱导RVSMC凋亡而导致钙化,骨保护素对高磷诱导的RVSMC钙化有保护作用,此作用与其降低RVSMC凋亡有关。